Bebé Mario y su hermano, Bebé Luigi, estaban volando al Reino Champiñón gracias a la Cigüeña. Sin embargo, Kamek, temiendo que los Niños Estrella arruinarían los planes de la Tropa Koopa, atacó a la Cigüeña y logró secuestrar a Luigi, pero dejó a Mario cayendo hacia la Isla de Yoshi en los eventos de Super Mario World 2: Yoshi's Island. Por casualidad, un Yoshi verde estaba caminando por debajo y suavizó la caída de Mario.
Luigi ha protagonizado dos juegos: el primero era un título de “edutainment (educación por entretenimiento)" llamado Mario Is Missing! en 1993, que trataba de los viajes de este fontanero por el mundo y contestando preguntas relacionadas con el lugar donde se encontraba. No fue producido por Nintendo
Yoshi es un dinosaurio bípedo, fácilmente reconocido por su color de piel verde y por su gran nariz redonda. Tiene una fila de escamas anaranjadas a lo largo de la cabeza, y en su lomo se encuentra un caparazón rojo, que sirve como silla de montar para Mario y compañía.
Princess Peach siempre está lista para una variedad de deportes y también disfruta hornear y cocinar. La princesa Peach y Mario son buenos amigos y se ayudan mutuamente siempre que pueden.
Un residente del Reino Champiñón que trabaja al servicio de la Princesa Peach. Toad tiene manchas rojas en la cabeza, aunque otros de su especie vienen en una variedad de colores. Toad es muy alegre y leal. Hace todo lo posible para ayudar a Mario y Luigi en sus esfuerzos por proteger el Reino Champiñón de Bowser, incluso si termina poniéndose en peligro en el proceso.
El archirrival autoproclamado de Mario. Wario viste un overol morado, un sombrero amarillo y tiene un bigote en zigzag reconocible al instante. Wario y Mario se conocen desde que eran bebés. Tiene una personalidad bulliciosa y no se preocupa por las cosas pequeñas. Le encanta el ajo y ganar dinero..